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PCR實驗室的設計規劃

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PCR實驗室的設計規劃

發布日期:2020-08-26 作者: 點擊:

1 PCR實驗室平麵布局PCR擴增檢驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區域:試劑貯存和準備區、標本製備區、擴增反應混合物配製和擴增區、擴增產物分析區。為避免交叉汙染,進入各個工作區域必須嚴格遵循單一方向進行,即隻能從試劑貯存和準備區→標本製備區→擴增反應混合物配製和擴增區→擴增產物分析區。 各實驗區之間的試劑及樣品傳遞應通過傳遞窗進行。        

 2實驗室空調通風係統設計及壓力控製 PCR實驗室並沒有嚴格的淨化要求,但是為避免各個實驗區域間交叉汙染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴格控製送、排風的比例以保證各實驗區的壓力要求。

 2.1試劑貯存和準備區 該實驗區主要進行的操作為貯存試劑的製備、試劑的分裝和主反應混合液的製備。試劑和用於樣品製作的材料應直接運送至該區,不得經過其他區域。試劑原材料必須貯存在本區內,並在本區內製備成所需的貯存試劑。 對與氣流壓力的控製,本區並沒有嚴格的要求。 2.2標本製備區 該區域主要進行的操作為樣本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。 擴增產物 分析區 試劑貯存和準備區 標本製備區 擴增反應混合物配製和擴增區 緩 衝 區 傳遞窗   本區的壓力梯度要求為:相對於鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠汙染。另外,由於在加樣操作中可能會發生氣溶膠所致的汙染,所以應避免在本區內不必要的走動。

 2.3擴增反應混合物配製和擴增區 該區域主要進行的操作為DNA擴增。此外,已製備的DNA模板 (來自樣本製備區)的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和製備區)製備成反應混合液等也可在本區內進行。 本區的壓力梯度要求為:相對於鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的汙染,應盡量減少在本區內的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超淨台內進行。

 2.4擴增產物分析區 該區域主要進行的操作為擴增片段的測定。 本區是主要的擴增產物汙染來源,因此對本區的壓力梯度的要求為:相對於鄰近區域為負壓,以避免擴增產物從本區擴散至其它區域。 

3汙染的預防與控製 PCR實驗室設計的核心問題是如何避免汙染。在實際工作中,常見的有以下幾種汙染類型:擴增產物的汙染;天然基因組DNA的汙染;試劑的汙染以及標本間的汙染。由於一旦發生汙染,實驗就必須停止,直到找到汙染源為止,而且實驗結果必須作廢,需重新進行實驗。所以發生汙染後再圍繞實驗室來尋找汙染源不但耗時而且繁瑣,浪費人力物力。因此要避免汙染,首先應是預防,而不是排除。

 3.1工作區域的嚴格劃分 (1)各個實驗區域設置合理; (2)各個實驗區域要有明顯的標記(如醒目的門牌或不同的地麵顏色等),以避免各個不同實驗區域設備物品、試劑等發生混淆。 

3.2合理的係統設置 (1)合理的空調通風係統設置,盡量采用全送全排的空調係統; (2)嚴格的氣流壓力控製,保證不同的實驗區內不同的壓力要求。

 3.3 規範的操作    (1)擴增檢驗實驗室的技術人員必須進行上崗培訓,經培訓合格後才能從事臨床基因擴增檢驗的工作; (2)在實驗操作過程中,操作者必須戴手套,並經常更換。此外,操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止汙染的措施; (3)清潔工作及時、正確。實驗工作結束後,必須立即對本區進行清潔。除常規的消毒液體對表麵進行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外,對一些實驗設備還應進行高壓消毒處理。

 3.4嚴格的管理 (1)嚴格控製進出實驗室的人員。與實驗無關的人員不得隨意進出實驗室,有條件的情況下要設置獨立的通道和進出整個實驗區的門; (2)盡量減少在實驗區內不必要的走動以減少交叉汙染的可能性。 (3)擴增產物分析區是主要的擴增產物汙染來源,廢液不能在實驗室中傾倒,必須經消毒液浸泡消毒後在遠離實驗室的地方棄掉,用過的吸頭等一次性材料也應經消毒液浸泡消毒後統一處理,如焚燒等; (4)擴增產物分析區可能會用到某些可致基因突變和有毒物質,應特別注意實驗人員的安全防護。 


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關鍵詞:PCR,實驗室,規劃設計

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